重现性
时间是重现性的测验。有主要供应商生产的填料,许多都有较好的批间重现性,即使是在很长的一段时间里。
颗粒大小,表示和量度
颗粒大小用微米做单位,并且指的是填料颗粒的平均直径。可以用许多的技术来测量并有不同的表示方法。对于不规则的填料,不可能定义一个“直径”。标示的直径是测量技术定义的等价的球直径。
通常使用的HPLC填料有一个粒度分布。表示的颗粒直径可以是体积平均值或是数字平均值。因此很难比较不同生产商生产的填料的粒度。如果使用相同测量方法和直径定义,填料的标示直径为5微米的,可能实际值在4到6.5微米之间。粒度的实际测量最终要用填料的渗透性来评价(标准化反压)。
不同填料的比较
平均颗粒大小对两个因素有影响。第一个是操作时的柱反压。反压与填料的直径的平方成反比。第二个是分离效率。固定柱长度,填料粒度越小柱效越高,因为扩散路径越短。在相同的柱长和流速的情况下,一根填的好的3微米填料的柱子分离度比5微米的高一倍,但代价是反压是5微米填料柱子的4倍。
现在,流行的是5微米的填料。这样的粒度相同的分析时间内比10微米的分离效能好,反压也合适。用3微米填料的短柱子越来越流行,因为相同时间内分离效果比5微米的高。以前用3微米填料的柱子寿命短,但现在的技术已经可以达到提高柱效有不缩短寿命。
用于快速分析。如果你使用技术水平高的填料将可以提高速度而又获得高柱效又不会缩短柱寿命。
用于常规的分析。既有高的分离效能柱压也可接受。
曾经是分析应用的标准填料粒度,10μm的填料以较一般的效能可以得到较好的峰分离,即使是长柱。这类填料现在主要用于常规的QA方法或是分析方法放大到制备应用的尝试。
